Rozhodnutí nabylo právní moci dne 2.listopadu 2017 <.>
<br>
Ministerstvo životního prostředí,Vršovická 65,100 10 Praha 10,(+420) 26712-1111,www.mzp.cz,info@mzp.cz
<br>
<br> ODESÍLATEL:
<br> Ing.XXXXX XXXXX,CSc <.>
ředitel odboru environmentálních rizik
a ekologických škod
Ministerstvo životního prostředí
Vršovická 65
100 10 Praha 10
<br>
<br>
<br> ADRESÁT:
<br> Vážený pan
prof.Mgr.XXXXXXXX XXXXXX,M.A <.>,Ph.D <.>
rektor UP v Olomouci
Univerzita Palackého v Olomouci
Křížkovského 8
771 47 Olomouc
<br>
V Praze dne
Č.j.:
Vyřizuje:
Tel.:
<br>
<br> 6.října 2017
34835/ENV/17
<br> Ing.Routa
267 122 554
<br>
<br>
<br>
R o z h o d n u t í
<br>
<br> Ministerstvo životního prostředí jako správní úřad příslušný podle § 5 zákona
č.78/2004 Sb <.>,o nakládání s geneticky modifikovanými organismy a genetickými
produkty,ve znění pozdějších předpisů,(dále jen „zákon“) a § 10 zákona č.500/2004
Sb <.>,správní řád,ve znění pozdějších předpisů <,>
<br> r o z h o d l o
<br> podle § 5 odst.8 zákona ve věci žádosti Univerzity Palackého v Olomouci,se sídlem
Křížkovského 8,771 47 Olomouc,IČ: 619 89 592,pracoviště LF UP Olomouc,Ústav
molekulární a translační medicíny,Hněvotínská 5,779 00 Olomouc,týkající se
uzavřeného nakládání ve třetí kategorii rizika s geneticky modifikovanými
mikroorganizmy Leishmania major a Leishmania braziliensis takto:
<br>
Univerzitě Palackého v Olomouci
<br> Křížkovského 8,771 47 Olomouc
<br> s e u dě l u j e p o v o l e n í
<br> k uzavřenému nakládání s GMO
<br> ve III.kategorii rizika <.>
<br>
<br>
<br>
<br> 2/14
<br>
<br>
<br> Ministerstvo životního prostředí,Vršovická 65,100 10 Praha 10,(+420) 26712-1111,www.mzp.cz,info@mzp.cz
<br> Náležitosti povolení podle § 18 odst.6 zákona:
<br> Oprávněná osoba
<br> Název: Univerzita Palackého v Olomouci,Křížkovského 8,771 47 Olomouc
<br> IČ: 619 89 592
<br> Specifikace geneticky modifikovaného organismu
<br> Geneticky modifikované organismy Leishmania braziliensis a Leishmania major
exprimující fluorescenční reportérové proteiny <.>
<br> Výsledné GMO budou připraveny až v laboratoři Univerzity Palackého v Olomouci <,>
transfekcí plasmidem.Dárcovskými organismy jsou živočich Discosoma coral
(korálovník) obsahující gen pro Coral-Derived Red Fluorescent Protein (DsRed)
a Aequorea victoria (medúza) obsahující gen pro GFP,jehož fluorescence
je zvýšena 35 krát pomocí dvou bodových mutací Ser65 za Thr a Phe64 za Leu
(EGFP).Jako zdroj genetické informace bude sloužit rekombinovaný plazmid
obsahující geny EGFP (pLEXSY-egfp-sat2) nebo DsRed (pLEXSY-red-sat2) <.>
<br> Specifikace genetické modifikace
<br> Leishmania braziliensis a Leishmania major byly získány z American Type Culture
Collection (ATCC) - Leishmania braziliensis (cat.no.ATCC30031),Leishmania major
(ATCC30012).Jsou kultivovány v M199 médiu (Sigma-Aldrich) s přídavkem 5 mM L-
glutaminu,20% fetálního telecího séra,100 U penicilinu a 100 ug streptomycinu <.>
<br> Pro transfekci budou použity plazmidy obsahující geny EGFP (pLEXSY-egfp-sat2)
nebo DsRed (pLEXSY-red-sat2).GMO vzniknou vnesením cizorodého dědičného
materiálu (transfekce plazmidy) <.>
<br> Údaje o vektoru
<br> Vektorem použitelným pro leishmanie je plazmid,který je po transfekci trvale
přítomen v příjemci ve zkrácené formě bez kazety rezistence na ampicilin a ColiE1
ori díky ssu rekombinaci do chromosomálního ssu-lokusu.Je amplifikovatelný v plné
délce v Escherichia coli za selekce ampicilinem <.>
<br> Přítomnost sekvence v dotyčném vektoru,která předává výběrový (selektovatelný)
nebo identifikovatelný fenotyp:
<br> Vektor obsahuje kazetu rezistence na antibiotika a to Nourseothricin (streptothricin)
a kazetu rezistence na ampicilin exprimovanou v prokaryotním hostiteli Escherichia
coli při jeho amplifikaci <.>
<br> Vektor nesoucí gen pro reporterový protein DsRed a gen rezistence
na Nourseothricin (streptothricin) pLEXSY-red-sat2 (Jena Bioscience) bude použit
pro přípravu transgenní Leishmania major.Vektor obsahuje i kazetu rezistence
na ampicilin v prokaryotním hostiteli Escherichia coli použitém pro amplifikaci <.>
<br>
<br>
<br> 3/14
<br>
<br>
<br> Ministerstvo životního prostředí,Vršovická 65,100 10 Praha 10,(+420) 26712-1111,www.mzp.cz,info@mzp.cz
<br> Vektor nesoucí gen pro reporterový protein EGFP a gen rezistence na Nourseothricin
(streptothricin) pLEXSY-egfp-sat2 (Jena Bioscience) bude použit pro přípravu
transgenní Leishmania braziliensis.Vektor obsahuje i kazetu rezistence na ampicilin
v prokaryotním hostiteli Escherichia coli použitém pro amplifikaci
<br> Transfekce bude provedena elektroporací se dvěma impulsy 10 ms a napětí 1400V <.>
Následně budou kultivovány v přítomnosti selektivního antibiotika Nourseothricin
po dobu 3 dnů ve třech malých lahvích pro tkáňové kultury o objemu 10 ml <.>
Po uplynutí této doby budou použity pro experimenty.10 lahviček patogenů bude
zamrazeno a uchováváno v kapalném dusíku,v prostorech pro skladování GMO <.>
Veškeré práce budou probíhat v laboratoři pro biologické riziko 3,č.2.21 <.>
Pro transfekci tří 100...