HAVARIJNÍ PLÁN PRACOVIŠTĚ PRO UVÁDĚNÍ GMO DO ŽIVOTNÍHO
PROSTŘEDÍ
<br>
<br> Uživatel (osoba oprávněná k nakládání s GMO)
<br>
Název (obchodní firma) a právní forma,je-li uživatelem právnická osoba
Nemocnice Na Homolce,státní příspěvková organizace
Adresa sídla
Roentgenova 37/2,150 30 Praha 5
IČO (pokud je přiděleno)
00023884
<br>
<br>
Přesné označení prostor a zařízení kde probíhá nakládání s GMO a kde
může nastat havarie
<br>
Jedná se o laboratoř čistoty třídy A v místnosti o čistotě třídy B (145 b,c) <,>
která je vybavena podtlakovým laminárním boxem typu biohazard,který má
samostatnou vzduchotechniku napojenou na centrální odtah,který je osazen
vysoce účinnou filtrací.Před vstupem do čistého prostoru je místnost č <.>
145d,kde je umístěn mrazicí box k uskladnění léčivého přípravku genové
terapie a také zde budou uskladněny ampule z fyziologickým roztokem <.>
<br>
Před vstupem do čistých prostor 145 b se pracovníci převlečou do sterilní
kombinézy,rukavic,roušky a ochranných brýlí.Laboratoř je vybavena <,>
buničinou,70% ethanolem; sterilizačním roztokem Virkon®S nebo roztokem
Barrydinu a zdravotnickým prostředkem PhaSeal na ředění přípravku genové
terapie fyziologickým roztokem <.>
<br>
Aplikace ONCOS-102 a následná hospitalizace budou probíhat v budově
oddělení Stereotaktické a radiační neurochirurgie (č.K133),Příloha 2 <.>
Jedná se o jinou budovu a přenos naředěného viru bude proveden za účasti
vedoucí lékárny nebo jeho zástupce v označeném speciálním boxu na přenos <.>
Vzdálenost jednotlivých budov je 150m
<br>
Během studie budou odebírány vzorky krve dle platného protokolu a
laboratorního manuálu,které budou zpracovány v oddělení Klinické
biochemie,hematologie a imunologie (Příloha 3).Vzdálenost od místnosti,kde
bude probíhat aplikace je asi 50m <.>
<br>
Přeprava geneticky modifikovaných organismů (pokud nakládání s
geneticky modifikovanými organismy zahrnuje jejich přepravu mimo
uvedené pracoviště)
<br>
Vialky s GMO (ONCOS-102) budou dodány World Courier Czech Republic
s.r.o <.>,která má oprávnění k distribuci geneticky modifikovaných organizmů
(Č.J.65449/ENV/12) přímo do Oddělení nukleární medicíny a PET centra a
budou předány proti podpisu hlavnímu lékárníkovi nebo jeho zástupci.Tato
osoba uskladní vialky s GMO do určeného mrazáku v místnosti č.145d a
<br>
<br>
<br>
<br> provede záznam o uskladnění <.>
<br>
V rámci nemocnice bude ONCOS-102 přepravován ve speciálním označeném
boxu.Pracovník,který box s GMO přenáší má vždy sebou dezinfekční roztok
a buničinu k okamžitému zamezení šíření GMO do okolí v případě havárie <.>
<br> Popis havárie,která může vzniknout v prostorách,kde probíhá
nakládání s geneticky modifikovanými organismy
<br>
Havárie je závažný neplánovaný únik GMO mimo určený prostor.V takovém
případě je třeba neprodleně učinit opatření k likvidaci havárie.K havárii může
dojít také při přepravě materiálu v rámci budovy pracoviště <.>
<br>
Pokud by při nakládání s GMO došlo k havárii musí být uvědomen vedoucí
lékárny (Dr.Renata Semeráková) nebo její zástupce a odborný poradce (Prof
Jiří Jonák) Havárie musí být do 24 hod.ohlášena na MŽP (ozp@praha5.cz) <.>
<br>
Nelze předem vyčerpávajícím způsobem uvést všechny možnosti typů
havárií.V případech typů,odlišných od zde popsaných je nutno postupovat
podle pokynů odborného poradce <.>
<br>
V prostorách č.145 (a-d),kde dochází k ředění GMO mohou v zniknout tyto t ypy
havárií:
<br>
<br> 1.Rozlití přípravku při ředění v laminárním boxu a kontaminace pracovních
pomůcek a oděvu pracovníka
<br>
2.Upadnutí a rozbití lahvičky s obsahem GMO při neopatrné manipulaci na
<br> trase mrazák- laminární box
<br>
3.Nesprávný postup úklidu a dekontaminace laminárního boxu po ukončení
činnosti
<br>
V prostorách č K133 kde bude probíhat aplikace GMO pacientovi a
společných prostorách (chodby a venkovní prostor mezi jednotlivými
budovami) <.>
<br>
<br> 1.Rozlití přípravku GMO při přepravě ve společných prostorách
<br>
2.Rozlití naředěného GMO z kanyly před aplikací (na pracovní pomůcky <,>
misky,podlahu,oděv pracovníka)
<br>
3.Vstříknutí GMO do očí nebo úst při neopatrném napojování injekční jehly na
<br> kanylu
<br>
4.Nesprávný postup úklidu a dekontaminace laminárního boxu po aplikaci
<br>
5.Poranění kůže jehlou s GMO
<br>
Přehled možných následků havárie na zdraví lidí,zvířata,životní prostředí
<br>
<br>
<br>
<br> a biologickou rozmanitost,včetně způsobů zjišťování těchto následků a
účinné ochrany před nimi
<br>
• ONCOS-102 je rekombinantní,lidský GM-adenovirus serotypu 5 (Adv5) <,>
<br> ve kterém byly provedeny genetické úpravy,které,proti divokým formám
wt Adv5,zásadním způsobem zvýšily jeho „bezpečnost pro“ člověka na
jedné straně a na straně druhé zásadně zvýšily jeho „nebezpečnost“ pro
rakovinné buňky,které ONCOS-102 specificky lyzuje.ONCOS- 102 je
DNA virus s onkolytickými účinky.Genetické úpravy vedly k tomu,že 1)
už vstup ONCOS-102 do buněk se děje přednostně do buněk
rakovinných,2) ONCOS-102 je ve zdravých buňkách replikačně ochromen
a může se účinně rep...

SOTIO a.s <.>
Jankovcova 1518/2,170 00 Praha 7,Česká republika
T: +420 224 175 111 sotio@sotio.com
www.sotio.com
<br> IČ: 24662623 DIČ: CZ24662623
Společnost zapsaná v Obchodním rejstříku
vedeném Městským soudem v Praze,oddíl B,vložka 16136 1/36
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br> ČÁST B
<br>
<br>
DALŠÍ NÁLEŽITOSTI ŽÁDOSTI PRO GENETICKY MODIFIKOVANÉ ORGANISMY JINÉ NEŽ
VYŠŠÍ ROSTLINY
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
SOTIO a.s <.>
Jankovcova 1518/2,170 00 Praha 7,Česká republika
T: +420 224 175 111 sotio@sotio.com
www.sotio.com
<br> IČ: 24662623 DIČ: CZ24662623
Společnost zapsaná v Obchodním rejstříku
vedeném Městským soudem v Praze,oddíl B,vložka 16136 2/36
<br>
<br>
<br>
<br>
1.Charakteristika geneticky modifikovaného organismu
<br>
Onkolytický adenovirus Ad5/3-D24-GMCSF; ONCOS-102 (původní název CGTG-102)
<br>
1.1.Geneticky modifikovaný organismus je:
<br>
- viroid
<br>
- RNA virus
<br>
- DNA virus
<br>
- baktérie
<br>
<br>
- houba (vláknitá mikromyceta,kvasinka)
<br>
- jiný mikroorganismus
<br>
- živočich
<br>
- savec
<br>
- hmyz
<br>
- ryba
<br>
- jiný živočich (uveďte třídu)
<br>
- jiné (upřesněte)
<br>
1.2.České a latinské rodové a druhové jméno geneticky modifikovaného organismu s
přesným určením rasy (plemene,formy,kmene,buněčné linie,patovaru)
<br>
Rod: Mastadenovirus
<br>
Druh: Adenovirus C,sérotyp 5
<br>
1.3.Genetická stabilita
<br>
1.3.1.Opatření k zajištění genetické stability,faktory,které tuto stabilitu ovlivňují
<br>
Adenoviry (AdV) patří mezi DNA viry s dvouvláknovou DNA o velikosti 36kb.Adenoviry jsou
vysoce rezistentní k fyzikálním i chemickým vlivům včetně změny pH a dlouho přežívají mimo
hostitele.Většina typů AdV je stabilních při 36°C týden,při pokojové teplotě několik týdnů a při 4°C
až několik měsíců.Infektivita AdV na papíru nebo ve fyziologickém roztoku zůstává nezměněna po
dobu týdnů a na neporózních materiálech i déle než měsíc.DNA polymeráza v AdV slouží k
opravě špatně spárovaných nukleotidů během replikace.Mezi typy AdV stejného druhu dochází k
rekombinacím,především v homologní oblasti.V buňce obvykle zůstává DNA vektor epizomálně a
je eliminován,když se buňka dělí nebo umírá.AdV jsou také schopny se rekombinovat s
chromozomální DNA a vektorové sekvence mohou být tak součástí genomu hostitelské buňky.K
takové integraci však dochází vzácně.Experimentálně při infekci buněčných linií viry o koncentraci
10 VP na hostitelskou buňku má integrace za následek mezi 10E3-10E5 událostí na buňku.1
<br>
<br> SOTIO a.s <.>
Jankovcova 1518/2,170 00 Praha 7,Česká republika
T: +420 224 175 111 sotio@sotio.com
www.sotio.com
<br> IČ: 24662623 DIČ: CZ24662623
Společnost zapsaná v Obchodním rejstříku
vedeném Městským soudem v Praze,oddíl B,vložka 16136 3/36
<br>
<br>
<br>
<br>
Integrace virální DNA nevede nutně k transformaci a většina integrovaného virálního genomu je
poškozena a obsahuje významné delece.Většina integrací adenovirální DNA nemá biologické
následky <.>
<br>
1.3.2.Metody ověřování genetické stability
<br>
A549 hostitelské buňky neobsahují adenovirovou sekvenci,tím je riziko genomické rekombinace
viru během výrobního procesu zanedbatelná.Design konstruktu ONCOS-102 zvyšuje genetickou
stabilitu omezením délky vložených sekvencí a tím zajišťuje sbalení virových částic.Následně <,>
během produkce viru genom ONCOS-102 je sbalen a je méně náchylný ke změně.Kompletní
genom referenční šarže ONCOS-102 byl porovnán z NCBI referenční sekvencí AC_000008.1 <.>
Oblasti rozdílné od Ad jsou tyto:
<br> E1A s delecí 24pb.Referenční článek2 byl použit k lokaci této delece z CR2 v E1A a to bází 919-
943 <.>
<br> Delece v oblasti E3.Referenční článek3 byl použit k lokalizaci 965 párů bází v E3 <.>
<br>
hGM-CSF v E3.Komerční plasmid pORF.hGM-CSF (Invitrogen) byl užit ke klonování hGM-CSF
genu do delečního místa v E3.Restrikční místa v E3 pro SunI a XXXX zůstaly na obou koncích
genové sekvence,protože hGM-CSF gem byl amplifikován primery těchto oblastí a sub-klonován
do kyvadlového vektoru pTHSN <.>
<br>
Chimerický vláknitý protein.Ad5 globulární hlavice vláknitého proteinu (knob domain) byla
nahrazena Ad3 hlavicí sekvencí AB361380.1 v NCBI databázi <.>
<br>
Genetická stabilita byla zjištěna restrikčním enzymem a sekvenováním.ONCOS-102 zůstává
geneticky stabilní nejméně po 7 pasážování.Dále exprese a funkcionalita genetického insertu pro
GM-CSF a specificita infekčního vektoru byl zjišťován in-vitro testy.Genetická stabilita je
srovnatelná mezi jednotlivými šaržemi <.>
<br>
1.3.3.Popis dědičných vlastností,které mají vyloučit nebo omezit rozšíření genetického
materiálu
<br>
ONCOS-102 (Ad5/3-D24-GMCSF) je onkolytický virus,který se selektivně replikuje v rakovinných
buňkách a není schopen množení u zdravých jedinců <.>
<br>
ONCOS-102 obsahuje delece 24 bp v konstantní oblasti E1A-CR2.Tato delece vede k poškození
proteinu E1A,který poté není schopen vazby na retinoblastomový (Rb) protein.To způsobí,že ve
zdravých buňkách nedojde k uvolnění transkripčního faktoru E2F nutného pro...

SOTIO a.s <.>
Jankovcova 1518/2,170 00 Praha 7,Česká republika
T: +420 224 175 111 sotio@sotio.com
www.sotio.com
<br> IČ: 24662623 DIČ: CZ24662623
Společnost zapsaná v Obchodním rejstříku
vedeném Městským soudem v Praze,oddíl B,vložka 16136 1/6
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
ČÁST A
<br>
<br>
<br>
<br> VŠEOBECNÉ NÁLEŽITOSTI ŽÁDOSTI
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br>
<br> SOTIO a.s <.>
Jankovcova 1518/2,170 00 Praha 7,Česká republika
T: +420 224 175 111 sotio@sotio.com
www.sotio.com
<br> IČ: 24662623 DIČ: CZ24662623
Společnost zapsaná v Obchodním rejstříku
vedeném Městským soudem v Praze,oddíl B,vložka 16136 2/6
<br>
<br>
<br>
<br>
Datum podání: 11.6.2016
<br>
1.Název projektu
<br>
Jednoramenné klinické hodnocení fáze I pro určení bezpečnosti a míry aktivace imunitního
systému při léčbě aktivní buněčnou imunoterapií DCVAC/PCa v kombinaci s imunostimulačním
adenovirem ONCOS-102 u pacientů s pokročilou metastatickou kastračně resistentní
rakovinou prostaty
<br>
2.Žadatel
<br> 2.1.Jméno (a),je-li žadatelem fyzická osoba: NA
2.2.Název a právní forma,je-li žadatelem právnická osoba:
<br> Nemocnice na Homolce státní příspěvková organizace
2.3.Státní občanství u fyzických osob: NA
2.4.Sídlo (u právnických osob)
Roentgenova 37/2,Praha 5-15030
2.7.IČO: 00023884
<br>
<br>
<br> 3.Charakteristika nakládání s geneticky modifikovaným organismem
<br>
3.1.Účel uváděn í do životn íh o prostředí,popřípadě náze v a označen í projektu
<br>
Zahájení klinického hodnocení SP015 „A phase I,single-arm study to evaluate safety and immune
activation of a combination of DCVAC/PCa,an active cellular immunotherapy,and ONCOS-102 <,>
<br> an immune-priming adenovirus,in men with advanced metastatic castration-resistant prostate
<br> cancer“ <.>
Studie bude prováděna ve Nemocnici na Homolce a sponzorována SOTIO a.s <.>
<br>
<br>
4.Doba uvádění do životního prostředí
<br>
4.1.Celková doba uvádění geneticky modifikovaného organismu do životního prostředí a datum
jeho předpokládaného zahájení
<br>
<br>
<br> Předpokládané zahájení studie je září 2016.Není pravděpodobné,že bude geneticky
modifikovaný organismus pravidelně uvolňován do prostředí.Na základě dosavadních znalostí by
se ONCOS-102 neměl vylučovat po intratumurální (i.t.) aplikaci.Nicméně u pacientů bude
monitorována přítomnost modifikovaného viru v moči a slinách před a po každé aplikaci viru po
dobu 24h <.>
<br>
5.Plánuje žadatel uvádění stejného geneticky modifikovaného organismu do životního
<br> prostředí v některém členském státě Evropských společenství nebo mimo jeho území?
<br>
Stát: Velká Británie
<br>
<br> SOTIO a.s <.>
Jankovcova 1518/2,170 00 Praha 7,Česká republika
T: +420 224 175 111 sotio@sotio.com
www.sotio.com
<br> IČ: 24662623 DIČ: CZ24662623
Společnost zapsaná v Obchodním rejstříku
vedeném Městským soudem v Praze,oddíl B,vložka 16136 3/6
<br>
<br>
<br>
Doba zahájení a trvání uvádění do životního prostředí: Zahájení studie ve Velké Británii
předpokládáme v září 2016.Předpokládaná doba studie je 24 měsíců (60 týdnů od náboru
posledního pacienta) <.>
<br>
6.Podal žadatel žádost pro uvádění stejného geneticky modifikovaného organismu do
<br> životního prostředí v některém členském státě Evropských společenství?
Stát: Finsko
Datum podání a číslo žádosti: B/FI/15/1MA
Žádost byla stáhnuta 15 března 2016 z důvodu přesunu klinické studie do Velké Británie
<br>
7.Podal žadatel žádost pro uvádění stejného geneticky modifikovaného organismu do
<br> životního prostředí nebo do oběhu mimo území Evropských společenství?
NA
<br> 8.Hodnocení rizika uvádění geneticky modifikovaného organismu do životního prostředí
(+) Hodnocení rizika podle § 7 zákona včetně dokumentace výsledků předchozích
uvádění do životního prostředí,především z hlediska různého rozsahu činnosti a
různých přijímajících ekosystémů
<br>
8.1.Shrnutí hodnocení rizika
<br>
ONCOS-102 (Ad5/3-D24-GMCSF) je onkolytický virus,který se selektivně replikuje v rakovinných
buňkách a není schopen množení u zdravých jedinců.Na základě stabilitních studií,genetické
modifikace snižují stabilitu a infektivitu ONCOS-102.V roztoku 0.9% NaCl stabilita ONCOS-102 se
snižuje po 5h při pokojové teplotě a za 48h již nebyly dekovány žádné infekční partikule <.>
<br>
ONCOS-102 obsahuje deleci 24 bp v konstantní oblasti E1A-CR2,což vede k poškození E1A
proteinu,který není schopen se navázat na buněčný Rb protein.Tím nedojde k uvolnění
transkripčního faktoru E2F nutného pro zahájení transkripce adenoviru.Volný E2F se naopak
volně vyskytuje v rakovinových buňkách,kde je Rb/p16 signální dráha často poškozena.Proto se
adenovirus s delecí 24bp v oblasti E1A množí selektivně v rakovinných buňkách <.>
<br>
Delece 965 bp v oblasti E3,která kóduje 6.7K a gp19K proteiny.Tyto proteiny zajišťují únik
adenoviru před imunitním systémem hostitele.Delece gp19K zvyšuje selektivitu viru pro nádorové
buňky.Tento protein snižuje hladiny HLA-1,čímž zamezuje detekci viru T-buňkami <.>
<br>
Inserce transgenu kódující lidský GMCSF (granulocytární-makr...